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          控制菌檢驗方法驗證

          放大字體  縮小字體 發布日期:2023-08-30
          核心提示:一. 控制菌檢驗方法驗證建立藥品的微生物限度檢查時,進行控制菌檢查方法的驗證,以確認所采用的方法適合于該藥品的的控制菌檢查
          . 控制菌檢驗方法驗證
          建立藥品的微生物限度檢查時,進行控制菌檢查方法的驗證,以確認所采用的方法適合于該藥品的的控制菌檢查方法測定。若藥品的組分或原檢驗條件發生改變可能影響檢驗結果時,檢驗方法應進行重新驗證。驗證試驗也可與供試品的控制菌檢查同時進行。

          2.1.驗證用菌株
          大腸埃希菌(Esherichia coli)【CMCC(B) 44102】或同等有效的
          金黃色葡萄球菌( Staphylococcus)【CMCC(B)26003】或同等有效的
          乙型付傷寒沙門菌(Salmonella paratyphi B)【CMCC(B) 50094】或同等有效的
          銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)【CMCC (B) 10104】或同等有效的
          驗證實驗所用的菌株傳代次數不得超過5代(從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為0 代),并采用適宜的菌種保藏技術,以保證試驗菌株的生物學特性。

          2.2.菌液制備
          大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型付傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養物至10mL營養肉湯培養基中,35~37℃培養18~24小時;分別取培養液 1mL加0.9%無菌氯化鈉溶液,采用10倍遞增稀釋法,稀釋至10-5~10-7,制成每1ml含菌數10~100CFU的菌懸液。

          2.3. 陰性菌對照組
          設立陰性菌對照組是為了驗證該控制菌檢查方法的專屬性。
          方法同試驗組,驗證大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌檢查法時的陰性對照菌采用金黃色葡萄球菌;驗證銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌檢查法時的陰性對照菌采用大腸埃希菌。陰性對照菌不得檢出。

          2.4.試驗組
          常規法
          • 大腸埃希菌 取相當于1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養基中,陽性菌對照加入大腸埃希菌10~100CFU,陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌 10~100CFU,35~37℃培養18~24小時,取此培養物按《微生物限度檢查SOP》大腸埃希菌項下規定檢查。
          • 大腸菌群 取含適量(不少于10ml)的膽鹽乳糖發酵培養基管3支,分別加入含供試品1g或1mL 、0.1g或0.1mL、含供試品0.001g或0.001mL的供試液,陽性菌對照加入大腸埃希菌10~100CFU,陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌 10~100CFU,35~37℃培養18~24小時,按《微生物限度檢查SOP》大腸菌群項下規定檢查。
          • 沙門菌 取供試品10g或10mL,直接或處理后接種至適量(不少于200mL)的營養肉湯培養基中,用勻漿儀或其他適宜方法混勻,陽性菌對照加入沙門菌 10~100CFU,陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌10~100CFU,35~37℃培養18~24小時。按《微生物限度檢查SOP》沙門菌項下規定檢查。
          • 銅綠假單胞菌 取相當于1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養基中,陽性菌對照加入銅綠假單胞菌10~100CFU,陰性菌對照加入大腸埃希菌10~100CFU,35~37℃培養18~24小時。按《微生物限度檢查SOP》沙門菌項下規定檢查。
          • 金黃色葡萄球菌 取相當于1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養基中,陽性菌對照加入金黃色葡萄球菌10~100CFU,陰性菌對照加入大腸埃希菌 10~100CFU,35~37℃培養18~24小時。按《微生物限度檢查SOP》金黃色葡萄球菌項下規定檢查。

          培養基稀釋法:
          供試品有抑菌作用,放大培養基量,由1:100放大到1:300、1:500或1:1000,由于容器體積限制,一般放大到500mL或1000mL,本法適用于抑菌作用不強的樣品。

          薄膜過濾法:
          采用薄膜過濾法時,取規定量供試液,過濾,沖洗,試驗菌應加在最后一次沖洗液中,過濾后,注入培養基或取出濾膜接入增菌培養基中。

          離心沉淀集菌法:
          取規定量供試液,如供試液含許多藥渣,先以500轉/分鐘離心3~5分鐘,取全部上清液,再以3000轉/分離心20分鐘,取下面1mL液體,并將適量的稀釋劑洗滌管底的洗滌液一并移入同瓶增菌液中,培養,本法適用于中度抑菌作用的樣品。
          中和法:
          在供試品溶液中加入相應的中和劑,以減除供試品中抑菌成分的作用,中和劑應對微生物無毒性,與抑菌成分結合后的產物應對微生物亦無毒性,或有毒性但不影響待檢菌的檢出。

          2.5.結果判斷
          至少應進行3次獨立平行試驗。陰性菌對照組不得檢出陰性對照菌。若試驗組檢出試驗菌,照該供試液制備方法和控制菌檢查法進行該供試品控制菌的檢查;若試驗組未檢出試驗菌,應采用自然沉降法、培養基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯合使用這些方法消除供試品的抑菌活性,并重新進行方法驗證。

          編輯:songjiajie2010

           
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          關鍵詞: 驗證 檢驗
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